Nick translation: differenze tra le versioni
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Il metodo della '''Nick translation''' è una tecnica di laboratorio di [[biologia molecolare]] che serve per operare la [[marcatore genetico|marcatura]] del [[DNA]] ovvero a creare sonde radioattive che potranno servire in seguito per esperimenti quali ad esempio il sequenziamento di un tratto di acido nucleico. La caratteristica che lo contraddistingue è quella di essere una tecnica capace di marcare fino alla totalità del filamento interessato, a differenza di altre tecniche di marcatura che interessano in primis le estremità ''5' P'' o ''3' OH'' del filamento. Vengono scelti per la marcatura degli [[Isotopo|isotopi]] radioattivi del fosforo, <sup>32</sup>P marcati sul fosfato α del [[deossiribonucleotide]].
Data la [[radioattività]] della tecnica, si è preferito utilizzare in sostituzione dei deossiribonucleotidi legati a molecole che agiscono come [[fluorofori]]
Il metodo si avvale di una sequenza di DNA doppio filamento, che una volta purificata viene ad essere tagliata con una endonucleasi ''a-specifica'' come la [[DNasi|DNAsiI]] capace di causare delle rotture a singolo filamento, in gergo chiamate proprio '''nick,''' generate dalla rottura dei legami [[Fosfodiesterasi|fosfodiesterici]]. La presenza di un nick è il substrato di reazione per la [[DNA polimerasi (DNA-dipendente)|DNApolI]]
La reazione può essere controllata inibendo chimicamente l'enzima, attraverso l'introduzione di [[tris-EDTA]] in soluzione: questo causa la denaturazione della miscela enzimatica portando al termine della reazione.
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