Mispairing PCR: differenze tra le versioni

Versione delle 13:11, 3 dic 2013

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In dettaglio consente, insieme ad altre applicazioni, di creare siti di restrizione per particolari [[enzima|enzimi]], laddove non fossero presenti naturalmente, con l'uso di [[primer]]s ([[oligonucleotidi]]) contenenti una o più [[Paio di basi|basi]] non [[Complementarietà|complementari]] (mispair) alla reale sequenza da amplificare.

La condizione necessaria per l'appaiamento fra il primer e il frammento di [[DNA]] che si vuole replicare è che, oltre alla serie di basi all'estremità 5’5' a monte delle basi che non si appaiano, almeno le ultime 2 basi all'estremità 3’3' del primer siano complementari alla sequenza genica che si vuole replicare. Questa tecnica può essere sfruttata per individuare mutazioni o varianti alleliche di un [[gene]], infatti, disegnando ''mispairing primers'' la cui estremità 3’3' si appai appena a monte della base da verificare è possibile creare un sito di restrizione solo nel caso in cui sia presente una determinata variante [[allele|allelica]], permettendo di rilevare la [[mutazione]] nel materiale genetico sottoposto a test.

Questo procedimento permette di trovare le marcature genetiche di determinate [[Malattia genetica|malattie]] in individui ancora sani, permettendo una terapia precoce.