Test di Coombs: differenze tra le versioni

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{{F|immunologia|agosto 2013}}

Il '''Testtest di Coombs''', è un [[Test|test di laboratorio]] utilizzato per rilevare la presenza di [[anticorpo|anticorpi]] fissati alla superficie dei [[globuli rossi]] (test di coombsCoombs diretto) oppure di anticorpi liberi nel [[siero sanguigno|siero]] (test di coombsCoombs indiretto). Il test di coombsCoombs indiretto viene eseguito prima di una procedura medica che prevedepreveda un eventuale scambio di sangue tra due pazienti (quale una [[trasfusione]] o launa [[gravidanza]]).; Quelloquello diretto invece viene eseguito a seguito della stessa qualora si sospetti che gli anticorpi del donatore (o della madre) siano venuti a contatto con gli [[eritrociti]] danneggiandoli. Quello diretto è inoltre eseguito per confermare la diagnosi di [[anemia emolitica]] autoimmune]] dove gli auto-anticorpi attaccano gli eritrociti del paziente stesso.

== Principi di funzionamento ==

Il principio che questo test utilizzasi perbasa produrresul unfatto risultato è il fenomeno per cuiche i [[globuli rossi]], pure essendo presenti nel [[sangue]] in quantità elevatissime, non vengono mai a contatto tra loro perché sulla loro membrana sono presenti cariche elettriche negative: c'è quindi una continua repulsione tra loro. Per far sì che dei globuli rossi agglutinino, quindi, è necessario che tra un globulo rosso e gli altril'altro si creino dei ''ponti'' abbastanza lunghi tali da poter vincere la forza di repulsione delle cariche negative: questi ''ponti'' sono degli anticorpi, specialmente le [[immunoglobuline]] della classe [[IgM]] che sono sufficientemente lunghe. Anche le [[IgG]] sono molto importanti per stabilire fenomeni di imponente immunizzazione ma sono troppo corte per provocare agglutinazione. Nel 1945 Coombs scoprì che aggiungendo una [[antiglobulina]], questa si interpone tra due IgG che si trovano sulle membrane dei globuli rossi legandoli a una distanza maggiore a quella del raggio d'azione della repulsione che questi hanno tra loro.

Anche le [[IgG]] sono molto importanti per stabilire fenomeni di imponente immunizzazione ma sono troppo corte per provocare agglutinazione. Coombs scoprì nel 1945 che aggiungendo una [[antiglobulina]] questa si interpone tra due IgG che si trovano sulle membrane dei globuli rossi legandoli ad una distanza maggiore a quella del raggio d'azione della repulsione che questi hanno tra loro.

Il test di Coombs può essere diretto o indiretto.

[[Immagine:Coombs_test_schematic.png|500px|right]]

== DirettoTest di Coombs diretto ==

Il test di Coombs diretto permette di determinare la presenza di anticorpi adesi alla superficie degli eritrociti.

Viene usato per visualizzare ''anticorpi incompleti attaccati ad antigeni dei globuli rossi''. Se aggiungendo alle emazie del paziente il [[Siero sanguigno|siero]] di Coombs si osserva il [[Agglutinazione del sangue|fenomeno dell'agglutinazione]], il test è positivo; se non agglutinano, il test è negativo.

Il test viene eseguito cimentando il sangue intero del paziente con il siero di Coombs (siero di coniglio con Ab anti-globulina umana).

La positività del risultato del test è data dalla presenza dell'anticorpo sulla superficie delle emazie, la negatività dall'assenza.

Nel caso in cui fossero presenti anticorpi adesi alla membrana dei globuli rossi, gli Ab presenti nel siero di Coombs creerebbero dei legami a ponte responsabili dell'agglutinazione dei globuli rossi e della formazione di precipitato (test di Coombs diretto positivo); nel caso in cui non fossero presenti, il campione non subirebbe alcuna modifica (test di Coombs diretto negativo).

La modalità diretta è utilizzata nella diagnosi della MEN ([[Malattia emolitica del neonato]]), delle MEA ([[Malattia emolitica autoimmune|Malattie emolitiche autoimmuni]]) e per la visualizzazione delle reazioni trasfusionali.

Il test di Coombs diretto è utilizzato nelle diagnosi di [[anemia emolitica autoimmune]] e [[malattia emolitica del neonato]].

=== Esempio ===

[[Anemia emolitica autoimmune]]. Viene prelevato un campione di sangue del paziente; i globuli rossi vengono lavati (rimuovendo il plasma e gli anticorpi non legati) e poi incubati con il siero di Coombs: le antiglobuline legano gli auto-anticorpi fissati sulla superficie degli eritrociti determinando agglutinazione.

Reazione di [[trasfusione]] di plasma. Globuli rossi del paziente ricevente gruppo A + siero del donatore gruppo B.

Il siero B contiene anticorpi anti-A; gli anti-A reagiscono con l'antigene A presente sul globulo rosso del ricevente; Si aggiungono le anti-Immunoglobuline le quali andranno a provocare l'agglutinazione.

Non c'è alcun bisogno di aggiungere siero anti-globuline poiché gli Ab (anti-A ed anti-B) del sistema AB0 sono completi (in quanto IgM) ed agglutinano direttamente in vitro i corrispettivi Ag (A e B), mentre in vivo ne provocano la quasi immediata emolisi (distruzione).

[[Malattia emolitica del neonato]]. Viene prelevato il sangue del neonato e con procedura analoga si cercano gli anticorpi anti-D chelegati hanno eventualmente agglutinato gliagli eritrociti (Rh positivi+) del neonato.

In caso di reazione di trasfusione di eritrociti non compatibili, fatto tuttavia assai raro e dovuto sempre ad errore umano, la reazione emolitica sarà peggiore, ed in tal caso sono gli anticorpi del ricevente ad agglutinare gli eritrociti del donatore trasfusi nel sangue del ricevente.

== Test di Coombs indiretto ==

Malattia emolitica del neonato. Viene prelevato il sangue del neonato e con procedura analoga si cercano gli anticorpi anti-D che hanno eventualmente agglutinato gli eritrociti (Rh positivi) del neonato.

Il test di Coombs indiretto permette di determinare la presenza di anticorpi anti-eritrocitari liberi nel plasma.

Il test viene eseguito cimentando il siero (del paziente ricevente) con gli eritrociti (del donatore) contro i quali si vuole ricercare la presenza di anticorpi; in seguito, si aggiunge il siero di Coombs.

== Indiretto ==

Consente, diversamente dal test di Coombs diretto, di visualizzare ''anticorpi incompleti presenti nel siero''.

Nel caso in cui siano presenti anticorpi anti-eritrocitari nel siero cimentato con i globuli rossi, si verranno a formare complessi antigene-anticorpo sulle membrane delle emazie che, legati a loro volta dagli anticorpi del siero di Coombs, determineranno agglutinazione (test di Coombs indiretto positivo); nel caso in cui non vi sia reazione tra gli anticorpi del siero e gli antigeni dei globuli rossi, non si verificherà alcun cambiamento all'interno della provetta (test di Coombs indiretto negativo).

Il test di Coombs indiretto è utilizzato nella ricerca di compatibilità donatore/ricevente nel caso di emotrasfusioni. Questo test trova impiego in prove di compatibilità e ricerca di anticorpi antieritrociti, antipiastrinici e antileucocitari.

=== Esempio ===

[[Tipizzazione eritrocitadel sangue|Tipizzazione]]. L'esameViene avvieneprelevato prelevandosiero aldel paziente del siero, che vienee messo a contatto con globuli rossi indi cui siano noti gli antigeni presenti sulla membrana. Ottenuti così dei globuli rossi sensibilizzati, seSe aggiungendo il siero di Coombs avviene la reazione di agglutinazione, il test è positivo, cioè nel siero sono presenti gli anticorpi in esame.

[[Cross-match]]ing (ulteriori reattività nelle trasfusioni). Viene eseguito come il precedente ma questa volta il siero del ricevente (con eventuali agglutinine sconosciute) viene messo a contatto con gli eritrociti del donatore (con eventuali antigeni sconosciuti); aggiungendo il siero di Coombs si possono sapere le eventuali reazioni avverse di questa trasfusione.

Possibile reazione da [[trasfusione]] di plasma. Globuli rossi del paziente ricevente Rh+ con siero del donatore Rh-. Il siero Bdel donatore contiene anticorpi anti-A;D gliche anti-A reagiscono conlegano l'antigene ARh presente sulsui globuloglobuli rossorossi del ricevente; Sisi aggiungono le anti-Immunoglobulineantiglobuline le quali andranno a provocare l'agglutinazione.

MalattiaRischio di [[malattia emolitica del neonato]]. In questa patologia laUna madre Rh negativa che ha un figlio Rh positivo (quindi) da padre Rh positivo, in seguito al primo parto può produrre anticorpi anti-D contro il [[fattore Rh]] (specialmente se non ha effettuato la profilassi). Per conoscere la presenza o meno di questi anticorpi (dannosi contro i successivi figli Rh positivi dal secondo parto in poi) si utilizza il test di coombsCoombs indiretto. Pertanto al siero della madre (con eventuali anticorpi anti-D) si aggiunge il sangue del fetoRh+ e quindi il siero di coombs.Coombs: Lala positività del test significa quindiindica che gli anticorpi anti-D sono presenti ed è evidente grazie all'emoagglutinazione che si viene a formare.

Cross-matching (ulteriori reattività nelle trasfusioni). Viene eseguito come il precedente ma al posto degli eritrociti con antigeni noti si usano eritrociti con tipizzazione sconosciuta. In tal modo aggiungendo il plasma del donatore (con eventuali agglutinine sconosciute) agli eritrociti del ricevente (con eventuali antigeni sconosciuti) e quindi aggiungendo il siero di Coombs si possono sapere le eventuali reazioni avverse di questa trasfusione. Quindi in sintesi, il test di Coombs indiretto in realtà altro non è che la procedura del test di Coombs diretto in cui il sangue del ricevente e del donatore vengono a contatto (e si mescolano) in vitro (tramite due prelievi differenti) invece che in vivo (tramite il solo prelievo del sangue del ricevente).

Il test di Coombs indiretto può essere visto come un test di Coombs diretto in cui il sangue del ricevente e del donatore vengono a contatto in vitro (tramite due prelievi differenti) invece che in vivo (solo il prelievo del sangue del ricevente).

Malattia emolitica del neonato. In questa patologia la madre Rh negativa che ha un figlio Rh positivo (quindi) da padre Rh positivo in seguito al primo parto può produrre anticorpi anti-D contro il fattore Rh (specialmente se non ha effettuato la profilassi). Per conoscere la presenza o meno di questi anticorpi (dannosi contro i figli Rh positivi dal secondo parto in poi) si utilizza il test di coombs indiretto. Pertanto al siero della madre (con eventuali anticorpi anti-D) si aggiunge il sangue del feto e quindi il siero di coombs. La positività del test significa quindi che gli anticorpi anti-D sono presenti ed è evidente grazie all'emoagglutinazione che si viene a formare.

== Collegamenti esterni ==

Questo test trova impiego in prove di compatibilità e ricerca di anticorpi antieritrociti, antipiastrinici e antileucocitari.

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{{Medicina trasfusionale}}

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