Amplified fragment length polymorphism: differenze tra le versioni

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La '''AFLP-PCR''' o semplicemente '''AFLP''' è un'analisi basata sulla [[Reazione a catena della polimerasi|PCR]] utilizzata in [[genetica]], per il [[DNA fingerprint]]ing, ed in [[Ingegneria genetica]].

È un metodo estremamente sensibile per individuare [[Polimorfismo_(biologia)|polimorfismi]] a livello del [[DNA]], descritto per la prima volta da Vos et al. nel 1993.<ref>Zabeau, M and P. Vos. 1993. Selective restriction fragment amplification: a general method for DNA fingerprinting. European Patent Office, publication 0 534 858 A1, bulletin 93/13.</ref><ref name=autogenerato1>{{Cita pubblicazione |autore=Vos P, Hogers R, Bleeker M, ''et al.'' |titolo=AFLP: a new technique for DNA fingerprinting |rivista=Nucleic Acids Res. |volume=23 |numero=21 |pagine=4407–14 |anno=1995 |mese=novembre|id=PMID 7501463 |pmc=307397 |url=http://nar.oxfordjournals.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=7501463 |doi=10.1093/nar/23.21.4407}}</ref> La procedura è divisa in tre passaggi:<ref>[http://www.keygene.com/keygene/techs-apps/FLASH3.php]</ref>

# Digestione del DNA cellulare totale con uno o più [[Enzimi di restrizione]] e legame delle [[Enzimi di restrizione|semi-sequenze di restrizione]] presenti sui frammenti a specifici ''adattori'' (frammenti a sequenza conosciuta);

# Amplificazione selettiva di alcuni di questi frammenti (''ampliconi'') con due primer per PCR complementari alla sequenza "'adattore + semisequenza di restrizione + sequenza selettiva<ref>una sequenza arbitraria e non degenerata (tipicamente tra 1 e tre nucleotidi) utile per una selezione di precisione</ref>'";

# Separazione degli ''ampliconi'' mediante elettroforesi su gel seguita da visualizzazione delle bande.

AFLP non è un acronimo ed è incorretto, nonostante numerosissime pubblicazioni tendano a farlo, riferirsi a questo metodo come "Amplified fragment length polymorphism",<ref>{{Cita pubblicazione |autorename=Vosautogenerato1 P, Hogers R, Bleeker M, ''et al.'' |titolo=AFLP: a new technique for DNA fingerprinting |rivista=Nucleic Acids Res. |volume=23 |numero=21 |pagine=4407–14 |anno=1995 |mese=novembre|id=PMID 7501463 |pmc=307397 |url=http://nar.oxfordjournals.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=7501463 |doi=10.1093/nar/23.21.4407}}</ref> poiché quelli analizzati da questo metodo non si considerano polimorfismi di lunghezza quanto piuttosto polimorfismi di presenza-assenza.

Una variante dell'AFLP è la cDNA-AFLP,<ref>[http://www.keygene.com/keygene/techs-apps/technologies_gene.php cDNA-AFLP]</ref> utilizzata per quantificare le differenze in termini di espressione genica.

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== Note ==

<references />

{{Reflist|30em}}