Real time PCR: differenze tra le versioni

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Versione delle 17:05, 22 nov 2017

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{{F|biochimica|luglio 2016}}

La '''PCR real-time''', denominata anche '''PCR quantitativa''' o '''PCR quantitativa in tempo reale''' (rtq-PCR), è un metodo che simultaneamente amplifica ([[reazione a catena della polimerasi]] o PCR) e quantifica il [[DNA]].

Il DNA è amplificato da reazioni a catena della [[DNA-polimerasi]]. Dopo ogni turno di amplificazione, il DNA è quantificato. I metodi comuni di quantificazione includono l'uso delle colorazioni [[fluorescenza|fluorescenti]] che [[intercalanti|intercalano]] con il DNA doppio-filamento (ds) e gli [[oligonucleotide|oligonucleotidi]] modificati del DNA (denominati sonde) che sono fluorescenti una volta ibridati con un DNA. Spesso la PCR real-time è combinata con la [[Reverse transcriptase-polymerase chain reaction|PCR Retro Trascrizionale]] (RT-PCR) per quantificare i livelli di espressione di specifici RNA: la retro-trascrizione (o trascrizione inversa) produce del DNA complementare a singolo filamento detto [[cDNA]] (complementary DNA) mantenendo inalterati i rapporti relativi di concentrazione delle diverse specie degli RNA. In questo modo è possibile, ad esempio, misurare l'espressione relativa di un gene ad un tempo particolare, o in una cellula o in un tipo particolare di tessuto. La combinazione di queste due tecniche è spesso denominata RT-PCR quantitativa.