Cianina: differenze tra le versioni

Versione delle 14:32, 15 nov 2017

Versione delle 19:10, 25 nov 2017

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Le cianine sono adoperate per marcare proteine, [[anticorpi]], peptidi, sonde per acidi nucleici e qualsiasi altro tipo di biomolecola adoperata in varie tecniche di detection basate sulla fluorescenza, come ad esempio la [[citometria a flusso]], [[microscopia]] (principalmente nello spettro del visibile, ma anche in UV e IR), saggi in micropiastre, [[microarray]] e molto altro.

==== Marcatura di acidi nucleici ====

In esperimenti di microarray, il [[DNA]] o l'[[RNA]] può essere marcato sia con Cy3 sia con Cy5, in quanto portano il gruppo reattivo N-idrossisuccinimmidil [[estere]] (NHS-estere). Dal momento che questo gruppo reagisce senza difficoltà soltanto con [[ammine]] alifatiche, di cui gli acidi nucleici sono sprovvisti, è necessario modificare precedentemente il campione con gruppi amminoallilici. Questa operazione è effettuata incorporando nucleotidi modificati durante reazioni di amplificazione. Una buona resa è ottenuta quando si raggiunge una marcatura ogni 60 basi, poiché marker troppo vicini tra loro provocherebbero un effetto di [[Smorzamento (fluorescenza)|smorzamento]] del segnale (quenching effect).

==== Marcatura di Proteine ====

Anche per questa operazione, come per gli acidi nucleici, la marcatura è possibile grazi al gruppo reattivo terminale NHS-estere o al gruppo maleimide, poiché reagiscono con i gruppi [[tioli]]ci dei residui di [[cisteina]].